Аттестационная комиссия
Комиссия по аккредитации
Комиссия по экспертов
Распоряжения, инструкции
Нормативные акты
ПОДГОТОВКА КАДРОВ
Номенклатура
Организации
Ученые советы
Семинары
Диссертации		 Научные руководители
Ученые
Докторанты
Постдокторанты
CNAA logo

 română | русский | english


Молекулярный анализ некоторых факторов транскрипции, дифференциально экспрессирующихся в репродуктивных органах томата


Автор: Bondarenco Vladimir
Степень:доктор биологических наук
Специальность: 03.00.15 - Генетика
Год:2010
Научный руководитель: Nicolae Barbacar
доктор хабилитат, профессор, Институт генетики, физиологии и защиты растений АНМ
Институт: Институт генетики, физиологии и защиты растений АНМ
Ученый совет: DH 10-03.00.15-27.03.08
Институт генетики, физиологии и защиты растений АНМ

Статус

Диссертация была зашищена 22 апреля 2010
Утверждена Национальным Советом 5 июля 2010

Автореферат

Adobe PDF document – 2.47 Mb / на румынском
Adobe PDF document – 2.21 Mb / на русском

Ключевые слова

томат, флоральные органы, репродуктивная система, мейоз, экспрессия генов, факторы транскрипции, репарация ДНК

Аннотация

Диссертация содержит: введение, три главы, выводы и практические рекомендации, библиографию из 246 источников, 4 приложения, 101 страницу основного текста, 124 страницы общего обьёма, 32 рисунка, 7 таблиц. Полученные результаты опубликованы в 9 научных работах.

Цель работы: молекулярно-генетическая характеристика ранее не описанных генов факторов транскрипции, дифференциально экспрессирующихся в репродуктивных органах томата в ходе мейоза.

Задачи: выявление новых генов факторов транскрипции, дифференциально экспрессирующихся в репродуктивных органах томата; молекулярная характеристика найденных генов; изучение дифференциальной экспрессии данных генов во флоральных органах томата; оценка возможности использования охарактеризованных генов в качестве молекулярных маркеров в селекции или при паспортизации генотипов томата.

Научная новизна. Впервые была изучена экспрессия генов трёх семейств регуляторных факторов на различных стадиях профазы I мейоза в различных флоральных органах томата. Были идентифицированы и охарактеризованы гены и фрагменты новых генов: регуляторная область гена ТМ6, геномная последовательность LeCDPK1 и структурно- функциональный аналог гена репарации RAD16 – ген TRL1.

Теоретическое значение. Получены новые сведения о функционировании генных сетей, обеспечивающих репродуктивную функцию растений. Выявлены важные молекулярные, ограно-специфичные механизмы поддержания нативности генома у растений.

Практическое значение работы. Для паспортизации генотипов томата и селекции посредством молекулярных маркеров предложены новые праймеры. В качестве молекулярного маркера предлагается новый минисателлит, выявленный в регуляторной области гена ТМ6.

Внедрение научных результатов. Первичная структура 3х новых геномных клонов и их молекулярная характеристика опубликована в международном банке генов (NCBI), и доступна заинтересованным учёным во всём мире.

Содержание


1. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ФОРМИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ РАСТЕНИЙ
  • 1.1. Молекулярные аспекты формирования флоральной системы
  • 1.1.1. Появление молекулярной модели формирования цветка
  • 1.1.2. Современные представления о формировании флоральной системы
  • 1.2. Регуляция транскрипции у эукариот
  • 1.3. Факторы транскрипции
  • 1.3.1. Факторы транскрипции, содержащие домен MADS box
  • 1.3.2. Факторы транскрипции, содержащие домены «цинковые пальцы»
  • 1.3.3. Протеинкиназы
  • 1.4. Выводы

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЁННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
  • 2.1. Ферментативная обработка нуклеиновых кислот
    • 2.1.1. Обработка ферментами рестрикции
  • 2.2. Субклонирование фрагментов ДНК в плазмидах
  • 2.3. Клонирование и выделение плазмид
    • 2.3.1. Генетическая трансформация
    • 2.3.2. Выделение плазмидной ДНК
  • 2.4. Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле
    • 2.4.1. Электрофорез молекул ДНК в агарозном геле
    • 2.4.2. Окраска агарозного геля,содержащего ДНК
    • 2.4.3. Электрофорез молекул РНК в агарозном геле, содержащем формальдегид
    • 2.4.4. Окраска агарозного геля, содержащего РНК
  • 2.5. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля методом электроэлюции
  • 2.6. Определение первичной структуры ДНК
    • 2.6.1. Амплификация
    • 2.6.2. Осаждение этанолом
    • 2.6.3. Секвенирование
  • 2.7. Выращивание и сбор растительного материала
  • 2.8. Приготовление цитологических препаратов из пыльников томата
  • 2.9. Выделение нуклеиновых кислот из растительного материала
    • 2.9.1. Выделение тотальной ДНК из растительного материала
    • 2.9.2. Выделение тотальной РНК из растительного материала
    • 2.9.3. Получение кДНК на основе мРНК
  • 2.10. Полимеразная Цепная Реакция
  • 2.11. RAPD-анализ
  • 2.12. Полуколичественная ПЦР
  • 2.13. ПЦР в реальном времени
  • 2.14. Заключение к главе 2

3. НЕКОТОРЫЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ
  • 3.1. Гены, содержащие домен MADS-box
    • 3.1.1. Скрининг геномных библиотек и библиотек кДНК
    • 3.1.2. Рестриктный анализ обнаруженных геномных клонов
    • 3.1.3. Анализ нуклеотидной последовательности
    • 3.1.4. Изучение дифференциальной экспрессии MADS-box генов
  • 3.2. Гены, кодирующие протеинкиназы
    • 3.2.1. Скрининг геномных библиотек и библиотек кДНК
    • 3.2.2. Рестрикционное картирование
    • 3.2.3. Анализ нуклеотидной последовательности
    • 3.2.4. Изучение экспрессии гена LeCDPK1 в репродуктивных органах томата
  • 3.3. Гены, содержащие домен Zn-finger
    • 3.3.1. Анализ нуклеотидной последовательности
    • 3.3.2. Экспрессия TRL1 в условиях фоновой радиации
    • 3.3.3. Экспрессия TRL1 после γ-облучения
    • 3.3.4. Экспрессия после УФ-облучения
  • 3.4. Изучение факторов транскрипции в качестве молекулярных маркеров
    • 3.4.1. Тестирование праймеров серии LE
    • 3.4.2. Тестирование праймеров SolCDPK
    • 3.4.3. Тестирование праймеров ZmPK
  • 3.5. Заключение к главе 3