Диагностика вируса ямчатости древесины яблони в системе сертификации посадочного материала плодовых культур
|
СтатусДиссертация была зашищена 28 сентября 2016Утверждена Национальным Советом 15 ноября 2016 Автореферат – 2.22 Mb / на румынском – 1.62 Mb / на русскомДиссертацияCZU 634.1[632.35+632.38](478)
|
Ключевые слова
вирус, ямчатость, яблоня, оптимизация, методы, семечковые породы, тестирование, сертификацияАннотация
Структура диссертации. Введение, 4 главы, общие выводы и рекомендации, 100 страницах основного текста, 164 библиографических источника, 25 рисунков, 12 таблиц и 16 приложений. Результаты опубликованы в 11 научных работах.
Область исследований. Защита растений.
Цель работы. Усовершенствовать и оптимизировать методы диагностики вируса ямчатости древесины яблони и применить их в системе сертификации плодового посадочного материала семечковых культур, согласно европейским стандартам сертификации.
Задачи исследований. Выявить и идентифицировать вирулентные штаммы вируса ямчатости древесины яблони. Определить реакцию на перенос вируса ямчатости древесины яблони на травянистые индикаторы. Оптимизировать методику очистки вируса ямчатости древесины яблони. Разработать диагностическую антисыворотку к вирусу ямчатости древесины яблони. Усовершенствовать и оптимизировать методы диагностики вируса ямчатости древесины яблони. Внедрить оптимизированные методы диагностики в систему сертификации плодового посадочного материала семечковых культур.
Новизна исследований. Впервые в Молдове приготовлена высокоспецифичная антисыворотка, способная выявлять вирус ЯДЯ методом ИФА. Оптимизирован метод ПЦР для диагностики вируса ЯДЯ, на базе приготовленных диагностических антител проведён метод«Immunocapture», разработаны календарные сроки выявления вируса ЯДЯ.
Решенная важная научная проблема состоит в научном обосновании методологических подходов, направленных на усовершенствование и оптимизацию методов диагностики ВЯДЯ в системе производства безвирусного посадочного материала. На основании результатов исследований специфичности полученных антисывороток, усовершенствования оптимизированных методов и определения календарных сроков проведения тестирования ВЯДЯ, что позволило разработать, усовершенствовать и применить оптимизированные методы в системе сертификации безвирусного посадочного материала семечковых культур.
Теоретическое значение работы состоит в разработке и усовершенствовании надёжных методов диагностики вируса ямчатости древесины яблони, для тестирования и ретестирования плодового посадочного материала, что послужит в качестве теоретической основы экспресс методов тестирования двух других латентных вирусов яблони. Усовершенствование и оптимизация методов диагностики позволит решить ряд теоретических и практических задач по переводу плодового питомниководства на международные нормы сертификации.
Практическая значимость: полученные экспериментальные данные позволяют рекомендовать применение оптимизированных методов в работах по получению безвирусных клонов с целью перевода питомниководства республики на безвирусную основу и международные нормы сертификации.
Внедрение научных результатов: внедрены в лаборатории вирусологии
НПИСВиПТ и широко применяются в работах по получению безвирусных клонов, и в
хозяйствах республики: SRL „Surinmih”, SRL „GelnacrAgro”, GȚ „Melnic Ioana Feodor”, GȚ
„Cebotari Feodor Mihail”, GȚ „Ghilinschii Dumitru” в питомниках семечковых культур.
Содержание
- 1.1. История изучения, круг растений хозяев, эпидемиология, экономическое значение
- 1.2. Диагностика ВЯДЯ биологическими методами
- 1.3. Диагностика ВЯДЯ иммунологическими и молекулярно-генетическими методами
- 1.4. Выводы к главе 1
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
- 2.1. Материалы исследований
- 2.2. Методы исследований
- 2.2.1. Выявление и перенос вируса, на древесные и травянистые индикаторы
- 2.2.2. Получение очищенных препаратов вируса, иммунизация кроликов и оценка качества антисывороток
- 2.2.3. Иммунологические и молекулярно-генетические методы диагностики ВЯДЯ
- 2.3. Схема закладки эксперимента
- 2.4. Выводы к главе 2
3. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА ЯМЧАТОСТИ ДРЕВЕСИНЫ ЯБЛОНИ (ВЯДЯ)
- 3.1 Выявление изолятов вируса, перенос и накопление вируса на древесных и травянистых индикаторах
- 3.2. Получение очищенных препаратов вируса ямчатости древесины яблони
- 3.3. Получение и определение качества антисыворотки
- 3.4. Выводы к главе 3
4. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО – ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА ЯМЧАТОСТИ ДРЕВЕСИНЫ ЯБЛОНИ
- 4.1. Оптимизация условий проведения иммуноферментного анализа
- 4.2. Усовершенствование и оптимизация метода иммуносорбентной электронной микроскопии
- 4.3. Оптимизация метода полимеразной-цепной реакции (ОТ-ПЦР)
- 4.4. Оптимизация метода «Immunocapture» и оценка экономическщй эффективности его применения
- 4.5. Выводы к главе 4
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ И ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Официальные оппоненты
- Nicolae Pamujac
доктор хабилитат, профессор, Государственный аграрный университет Молдовы - Dumitru Terteac
доктор, доцент
Члены Ученого Совета
- Mihail Rapcea, член
доктор хабилитат, профессор, Научно-практический институт садоводства, виноградарство и пищевых технологий - Eugenia Soldatenco, секретарь
доктор хабилитат, доцент, Научно-практический институт садоводства, виноградарство и пищевых технологий - Mihail Vronschih, член
доктор хабилитат, профессор - Vasile Voineac, член
доктор хабилитат, профессор - Nichita Croitoru, член
доктор, доцент
Диссертации
