Некоторые аспекты изучения генетически модифицированных растений (Nicotiana tabacum, var. Xanthi) и методы их тестирования
|
СтатусДиссертация была зашищена 20 декабря 2007Утверждена Национальным Советом 28 февраля 2008 Автореферат – 0.86 Mb / на румынскомДиссертацияCZU 577.218: 575.822: 632.954: 633.71
|
Ключевые слова
экспрессия и наследование трансгенов, табак, гербицид Basta®, тестирование ГМРАннотация
Впервые были изучены трансгенные линии табака в поколении Т1, содержащие гены CsLFY и bar под контролем промотора 35S CaMV. Был проведен анализ наличия, наследования и экспрессии трансгенов на молекулярном и физиолого-биохимическом уровнях.
Присутствие трансгенов в геноме потвердил анализ ПЦР на основе специфических праймеров. Была выявлена экспрессия генов CsLFY и bar на уровне транскрипции и трансляции. Во всех изученных вегетативных органах были найдены белковые фракции с Mr 44 и 23 кДа, соответствующие продуктам функциональной активности генов CsLFY и bar, характеризующие конститутивную экспрессию этих наследственных факторов.
В поколении Т1 большинство исследуемых линий (10 из 13) показали характерное наследование для однолокусной вставки трансгена (3:1). Одна линия проявила расщепление характерное для дигемизигот (15:1), а две линии - атипичные соотношения трансгенных и немодифицированных растений (1:1, 1:3).
Трансгенные линии характеризуются увеличением длины растения, ранним появлением цветков, высоким содержанием суммарных белков и перекиси водорода, а также повышенной активностью каталазы в листьях.
Была выявлена функциональная роль гена bar в индукции генетического и физиолого-биохимического механизма устойчивости к гербициду Basta. При обработке трансгенных линий табака гербицидом Basta был обнаружен высокий уровень синтеза белков с молекулярной массой 39 кДа, который предположительно соответствует ферменту глютаминсинтетаза (GS1), и с молекулярной массой 164 кДа, соответствующий ферменту глютаматсинтаза (Fd-GOGAT), участвующие в метаболизме азота и влияющие на повышение устойчивости к данному гербициду.
Анализ трансгенных линий табака выявил различные уровни устойчивости к гербициду Basta как в условиях in vivo, так и in vitro. Действие гербицида снижает количество воды, пигментов, активность фотосинтеза, индуцирует появление депигментации и некроз тканей, ингибирует рост растений. Также установлены количественные и качественные изменения суммарных белков со средней и низкой молекулярной массой, среди которых и фермента рибулезодифосфаткарбоксилазы.
Впервые был проведен анализ на присутствие генетических модификаций, используя различные методы, включая и ПЦР.
Официальные оппоненты
- Igor Cemortan
доктор, доцент, Государственный университет медицины и фармации им. Николая Тестемицану - Nicolae Barbacar
доктор хабилитат, профессор, Институт генетики, физиологии и защиты растений АНМ
Диссертации
