Оптимизация метода жидкостной хроматографии высокого давления для применения в фармакокинетическом анализе
|
СтатусДиссертация была зашищена 27 февраля 2008Утверждена Национальным Советом 17 апреля 2008 Автореферат – 0.43 Mb / на румынскомДиссертацияCZU 615.074:543.544.5.068.7
|
Ключевые слова
ВЭЖХ, фармакокинетический анализ, подготовка проб, депротеинизация, "однофазная” экстракция, сбор данных, обработка данных, производная хроматография, моделирование хроматограмм, оптимизация селективности.Аннотация
Работа посвящена разработке алгоритмов оптимизации всех стадий биофармацевтического анализа с использованием метода ВЭЖХ, включая выбор способа подготовки проб, оптимизацию селективности хроматографического разделения и выбор оптимальных алгоритмов обработки информации.
Впервые предложен оригинальный способ подготовки проб биоматериала, основанный на однофазной экстракции. Выполнен сравнительный анализ ряда предварительно протестированных и оптимизированных неселективных методов подготовки проб. Определены диапазоны их применимости в зависимости от полярности и других свойств аналитов, предложена общая схема выбора оптимального способа подготовки проб. Изучены возможности минимизации объема биоматериала, включая анализ пятен крови на бумаге.
Дан ряд рекомендаций по выбору материала заполнения колонок и предколонок, рациональному размещению модулей хроматографической аппаратуры. Показана возможность компенсации вклада предколоночного объема в размывание хроматографических зон.
Предложены рекомендации по выбору оптимальных параметров дискретизации аналоговых хроматографических сигналов и алгоритмов обработки хроматограмм. Впервые предложено использование инвертированной второй производной хроматографического сигнала для обработки хроматограмм, осложненных значительным дрейфом базовой линии.
Для математического моделирования хроматограмм выбраны две алгебраические функции, наиболее адекватно описывающие форму реальных пиков: экспоненциально модифицированная функция Гаусса (EMG) и асимметричная бисигмоидальная. Разработан алгоритм разметки хроматограмм, содержащих перекрывающиеся пики, и оценки параметров выше названных алгебраических функций. Для подгонки модельных функций, как алгебраических, так и аппаратных, предложено использовать алгоритм “Two step”.
Обнаружено, что в большинстве случаев соблюдается линейная зависимость между логарифмами параметров алгебраических функций, описывающих хроматографические пики и логарифмом концентрации вытеснителя в подвижной фазе, что позволило разработать простой и эффективный модельный метод оптимизации селективности хроматографической системы. В качестве объективного критерия оценки качества хроматограмм предложено произведение коэффициентов частичного перекрывания всех аналитических пиков.
Официальные оппоненты
- Vladimir Safta
доктор хабилитат, профессор, Государственный университет медицины и фармации им. Николая Тестемицану - Livia Uncu
доктор, доцент
Диссертации
